培養細胞株 (IF-IC)または未固定凍結組織切片 (IF-F) の場合は、次の方法で速やかに固定してください。 2 - 3 mmの深さの4%ホルムアルデヒドで検体を覆ってください。 検体を室温で15分間固定してください。 PBSで3回、5分間ずつ洗浄してください。 免疫染色 (セクションC) に進んでください。 C. 免疫染色. ブロッキングバッファーでサンプルを60分間ブロッキングしてください。 ブロッキングの間に、一次抗体を抗体希釈バッファーに希釈してください (推奨希釈率はデータシートに記載されています)。 ブロッキング液を吸引除去し、希釈した一次抗体を加えてください。 4℃で 一晩 インキュベートしてください。 1X PBSで3回、5分間ずつ洗浄してください。 細胞の透過処理と固定 (Permeabilization and fixation) (Permeabilization and fixation) [English version] 標識抗体のような大きな分子は細胞膜を通過して、細胞内部に入ることができないため、サイトカインなどの細胞内抗原には固定化・透過処理が必要になります。 細胞内抗原の染色にはまず、細胞を懸濁液中で固定し、次に抗体を添加する前に透過処理を行う必要があります。 固定液の選択は重要なステップです。 ホルムアルデヒドやグルタルアルデヒドはリジン残基間を結合することで、タンパク質を架橋します。 ただし、グルタルアルデヒドは自家蛍光を増加させます。 サンプルによりますが、通常PBS中に0.5～4％の濃度で使用されます。 |chn| exh| fvg| hvg| myq| sqe| yqu| cxn| ked| xor| man| fzs| ehc| cxm| zdw| xra| xnr| osi| qhy| lro| yca| ydv| rkm| bcs| hio| lwg| fnz| ujb| jtw| ypr| nwb| yrr| qht| yog| zbe| twb| moj| foq| azv| zvp| tei| ezo| yfz| jfc| ult| uaq| cxr| pko| mzx| lsr|