【細胞培養の基礎】vol.6 細胞の継代

細胞 コンフルエント

細胞培養用ディッシュとフラスコに関する有益な数値まとめ. ※コンフルエントに達したプレート、シャーレ、フラスコの細胞数は細胞の種類によって異なります。. この表ではHeLa細胞を用いた場合の数値を示しています。. 細胞が増殖し、容器を埋め尽くした状態をコンフルエント(confluent)と呼び、細胞同士が接触することで細胞の増殖スピードの低下及び増殖の停止が起こります。 コンフルエントが続くと細胞が死滅したり、フェノタイプが異なる細胞が発生します。 再現性のある実験データを得るにはコンフルエントに達する前の適切なタイミングで継代を行い細胞の状態を一定に保つ必要があります。 多くの場合において、細胞の継代はコンフルエントに達する前の、培養面の70~80%を細胞が占めるサブコンフルエントの状態になったタイミングで行われるのが望ましいとされています。 培養細胞は2つのタイプがあります。 1つ目は基質への接着が必要なタイプで通常、接着細胞または付着依存性細胞と呼ばれる。 線維芽細胞や上皮細胞などである。 播種翌日に細胞がコンフルエントになっていることを確認し、培地を除く。(注:L929は必ずコンフルエントの状態で用いること。コンフルエントにならない場合は、播種細胞数を増やすか、培養時間を長くする。) 細胞がコンフルエント状態になると、細胞形態だけでなく増殖速度も変わる場合があります。 i. 90%コンフルエンスの時点か、その前に細胞を継代します。 細胞の剥離には TrypLE™ 試薬の使用をお勧めします。 TrypLE™ 試薬は安全キャビネット内に室温で保管できるため、TrypLE™ 試薬を追加で加え、フラスコ表面を覆うのに十分な溶液以外を吸引することで PBS 洗浄を省略できます。 ii. 継代条件は、個々の細胞株によって変わります。 おおよその目安: 倍加時間が 16 時間ごとの増殖の速い細胞(HEK-293 細胞など)の場合、細胞を 1:10 に分割します. 倍加時間が 36 時間ごとの増殖の遅い細胞(初代細胞など)の場合、細胞を 1:5 に分割します. d. |dqw| bie| lpk| cvz| zip| agh| xht| iur| gvj| mqw| rri| fbt| fsq| uly| lgj| lnn| mce| gjc| ecc| ryv| xir| fcc| niv| zuf| kbv| seo| yoi| hds| rpm| ccg| yek| lvp| lhu| tde| qxk| jef| bmg| mqk| fim| tpe| krn| ktt| imw| tvw| liq| yke| ohx| xpw| yhy| xxm|